异育银鲫溃疡病病原菌药物敏感性及池塘用药疗效

孟思妤1 孟长明1 陈昌福2

（1.河南省新乡市康大消毒剂有限公司；2.华中农业大学，武汉 430070）

异育银鲫（Carassius auratus gibelio）在养殖的过程中，可能有多种疾病发生。体表出现溃疡（见图1）症状是养殖鱼类比较常见的疾病之一。为了有效地治疗这种疾病，我们从具有典型症状的患病异育银鲫肾脏中分离一种优势菌，经初步鉴定属于弧菌（Vibrio sp.）。

为了控制由这种细菌性疾病对养殖

1.1 供试菌株

2015年4 月从江苏省射阳县某养殖场养殖的患溃疡病异育银鲫体内分离SYY0503061、SYY0503083、SYY0503092和SYY0503094等4个菌株，作为检测药物敏感性的供试致病菌株。

1.2 供试药物

本研究中用于对分离菌株进行药异育银鲫的危害，能在药物治疗这种疾病的过程中做到对症用药，利用分离菌株进行了对各种抗生素类药物的敏感性测定，并且在此基础上选择对分离菌株敏感的药物，在疾病发生的养殖池塘中进行了药物治疗疾病的试验，获得了比较理想的药物治疗效果，现将结果报告如下。

图1 患“溃疡病”异育银鲫的外观症状

1 材料与方法

物敏感性侧定的抗生素有如下6种。硫酸新霉素（Neomycin Sulfate，华北制药股份有限公司，批号：150513）、盐酸多西环素（Doxycycline Hyclate，浙江国邦药业有限公司，批号：150323）、甲砜霉素（Thiamphenicol，浙江国邦药业有限公司，批号：150415）、氟苯尼考（Florfenicol，华北制药股份有限公司，批号：150416）、乳酸诺氟沙星（Norfloxacin Lactat，浙江国邦药业有限公司，批号：150305），烟酸诺氟沙星（Norfloxacin，浙江国邦药业有限公司，批号：150218）等6种抗生素类药物，分别对分离菌株进行药物敏感性试验。

1.3 最小抑菌浓度（MIC）的测定

依日本化学疗法学会的方法进行[2]。即将各种供试药物分别用适宜溶酶溶解后，经过虑菌膜过滤，然后用灭菌后的MHA（Difco）培养基，将药物进行倍比稀释，最终每个试管中培养基中药物浓度达到100.0～0.025μg/mL的2倍稀释的13个浓度。于每管盛有2.9mL培养基的试管中分别加入100.0μL供试菌液，28℃的条件下培养5d后，肉眼观察证实无菌生长试管中的最低药物浓度，即判为该药物对分离菌株的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentrations，MIC）。

1.4 野外药物治疗试验

将经过在试管内抑、杀菌试验证明有较好的抑、杀菌效果的盐酸多西环素和氟苯尼考，依据MIC值的8.1倍计算出的用药量，作为每公斤鱼体的用药量。

2015年5月20 日开始，药物治疗试验在江苏省射阳县黄沙港镇某养殖场进行，选择发生了异育银鲫溃疡病的单个池塘面积为186.0～200.0亩的6口池塘（编号为Ⅰ-Ⅶ号）。根据药物敏感试验的结果，决定选择盐酸多西环素和氟苯尼考进行药物治疗试验。在Ⅰ-Ⅲ号池塘中按照13.0mg/ kg鱼体重的用药量，采用盐酸多西环素作为治疗药物；在Ⅳ-Ⅵ号池塘中按照13.0mg/kg鱼体重的用药量，采用氟苯尼考作为治疗药物；而在Ⅶ号池塘中不适用任何药物，作为对照池塘。

将药物首先分别定量添加在经过加热熟化的面粉糊中，搅拌均匀后再拌合在异育银鲫用颗粒饲料上制作成药饵，阴凉处经过1.0小时左右的晾干。投喂已显示出溃疡病症状的异育银鲫饲养池，每天投喂1次药饵，连续投喂5次为一个疗程。自投喂药饵开始后连续观察鱼群活动状况，统计试验池塘在试验期间鱼体的死亡鱼数量。并对死亡鱼体进行检查，判断是否因溃疡病引起的死亡。

2 结果

2.1 各种抗生素对分离菌株的MIC

6种供试抗生素对4个分离菌株的MIC测定结果如表1所示。由表1可以看出，供试药物对4个分离菌株显示出了不同的抑菌效力。所有菌株显示出对盐酸多西环素和氟苯尼考比较敏感。

2.2 池塘中药物治疗异育银鲫溃疡病的效果

药物治疗效果如表2所示。从表2所示结果可以看出，在开始投喂药物饵料后，采用2种药物进行治疗的池塘中的异育银鲫死亡数量呈现逐渐下降，而作为对照的Ⅶ号池塘中异育银鲫的死亡率则持续到试验结束也未见明显下降。用药池塘鱼体的死亡数量从用药后的第3d开始大幅度下降。至投喂药物饵料第9d时，投喂2种药物的6个池塘中鱼体的死亡数量均下降到30尾或者以下，在连续投喂9d药物饵料后，第10d的死亡数量已经每个池塘下降到10尾鱼以下，而未用药的对照池塘中鱼体的死亡数量至第10d仍然维持在比较高的水平。

3 讨论

利用抗生素类药物治疗养殖鱼类的传染性疾病，是国内外鱼病防治工作者常用的方法。不过，抗生素类药物随着使用的次数增加，致病菌对抗生素类药物可以产生不同程度的抗药性。已经有不少的研究结果证明，养殖鱼类病原菌已经对不少抗生素产生了不同程度的耐药性，同时，养殖鱼类体内的抗生素类药物残留问题，也已经成为关系到消费者健康与安全的公共卫生问题被国内外消费者广为关注。

为了使抗生素类药物在治疗养殖鱼类传染性疾病的过程中获得理想的疗效，就应该获得对养殖鱼类致病菌的药物敏感性监测数据，只有根据致病菌的药物敏感性数据才能正确地决定使用某种抗生素类药物。即只有在获得对致病菌对拟选用抗生素类药物敏感程度的基础上，才有可能在疾病的治疗过程中选择适当的药物和决定其适宜的用药量。不然，就只能因为盲目地选用药物，可能造成药物对养殖鱼类机体和养殖水环境的污染，而更容易造成治疗效果不佳的后果。

表1 6种抗生素对4个分离菌株的最小抑菌浓度

在本试验中，通过从具有典型症状的异育银鲫体内分离病原菌，完成对致病菌的药物敏感性测定后，根据其菌株对药物的敏感性，筛选到了两种抗生素类药物，在野外养殖池塘中对患病异育银鲫进行了药物治疗试验。显示出的明显疗效证明了通过药物筛选，根据致病菌对药物的敏感性用药，异育银鲫的细菌性溃疡病是可以有效地治疗的。

表2 2种抗生素药物对患溃疡病异育银鲫的药物治疗结果

关于如何利用抗生素对致病菌的MIC测定结果，知道实际治疗疾病过程中确定用药量的问题，本试验中是采照日本国的简易计算方法进行的，即针对鲤科鱼类选择用药剂量时，可以在使用8.1倍MIC的剂量。本试验参照这个方法，因为盐酸多西环素和氟苯尼考对4个分离菌株的MIC均为1.56µg/mL，所以最终采用了13.0mg/kg鱼体重的用药量，试验结果证明了以这样的方法确定用药量是有效的。

最后，还需要说明的一点是，因为病原菌对各种抗菌药物的敏感程度是会随着药物的使用频度，以及时间的变化而不断发生变化的。我们需要对致病菌对各种药物的敏感性进行实时监测，只有掌握了致病菌对药物感受性的变化，才是正确选择药物和决定用药量的基础。