顾雪林，菅攀阳，魏 宾，钮 静，宋学宏

(1.苏州市吴中区水产技术推广站，江苏 苏州 215104；2.苏州大学，江苏 苏州 215123)

加州鲈在苏州已有30余年的养殖与繁殖历史，目前已成为苏州市三大主导养殖品种之一，年产量达2.5万吨。近年来，随着养殖规模的扩大、养殖年限的增加，加州鲈育苗过程中的病害问题日益突出，病害严重时死亡率高达90%，引起巨大经济损失，严重挫伤了从业者的养殖积极性。

本文通过流行病学调查、症状观察、病原学检测等技术，对苏州市吴中区的一例加州鲈苗种培育阶段的高传染性疾病进行诊断分析，为控制该病继续蔓延提供防控思路。

一、流行病学调查

苏州市吴中区某加州鲈养殖育苗场共有8个600米2的铺底膜塘口，从广东引入加州鲈种鱼自繁自育。因自繁苗不够，在2021年3月中旬外购4 000尾/千克的加州鲈鱼苗放养于1号塘，放养密度为40万尾/亩，饲养至体长约3厘米时分塘。4月水温20～22℃时1号塘出现鱼苗死亡，半个月内其余7口陆续出现死亡，均为拉网分塘后出现死亡。至5月，池塘水温逐渐升至25～27℃，鱼苗长至3～8厘米时死亡量增加，死亡率达80%。发病鱼池底部滋生青苔，水体亚硝酸盐0.41毫克/升、氨氮0.3毫克/升、pH 8.2、溶氧7～8毫克/升。1号塘发病初期内服氟苯尼考、维生素C等，外泼碘制剂，病情有所好转，但半个月后水温上升时病情恶化，出现大批量死亡。

二、临床症状

病鱼体表发黑，背鳍、尾鳍基部发白，于水面上慢游、栖边，反应迟钝，少量鱼在水面螺旋式打转(图1A)；取病鱼观察，严重者体表发黑，背鳍、尾鳍基部无鳞、溃烂(图1B)；下颌与胸鳍基部出血(图1C)。解剖观察，肝脏与脾脏肿大、发白、充血(图2A)，肾脏肿大(图2B)；胃部食物少，空肠空胃，严重者腹腔具血水(图2C)。

图1 患病加州鲈体表病症

图2 患病加州鲈内脏器官症状

三、病原学分析

1.寄生虫检测

取典型的发病鱼8尾，肉眼查看和显微镜检测，体表、鳍、鳃、眼、口腔未见寄生虫；解剖后肉眼观察和显微镜检查，肝脏、脾、肾脏、肠道、胃也没有寄生虫。

2.细菌检测

采集10尾濒临死亡的发病鱼，转移到超净工作台无菌条件下解剖，以平板划线法从患病鱼的肝分离细菌，置于28℃恒温培养箱中培养24小时，获1株优势菌。菌落特征为米白色、边缘整齐、针尖大小的圆形菌落，经细菌的生理生化鉴定，并将纯培养菌株进行16S rDNA分子鉴定，鉴定结果为迟缓爱德华氏菌，生物型21311，可信度为98.95%。

3.病毒检测

针对加州鲈幼鱼发病症状以及高传染性现象，怀疑感染病毒，因此检测加州鲈常见的弹状病毒(MSRV)、虹彩病毒(LMBV)及传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)。根据GenBank中MSRV的N基因(MT818233.1)、LMBV的MCP基因(MK681855.1)、ISKNV的MCP基因(AF371960.1)等序列分别设计特异性引物，MSRV-F：ATGCCATATCCTGGTTCGTGA，MSRV-R：AACCCGAGCACTGGAGAAAC；LBMV-F：TACCGTCGTGTTTAGCCTTGTAC，LBMV-R：GGTGACCTGAGACCCACTATCG；ISKNV-F：GAATTCATGTCTGCAATCTCAGGTG，ISKNV-R：CTCGAGTTACAGGATAGGGAAGC；预测扩增子大小分别为152、658、1 392 bp。采集9尾病鱼，分别提取病鱼的肝、脾、肾、鳃、肌肉、肠道、胃、脑，3尾为1组，分别提取总RNA和DNA，然后进行PCR扩增。结果显示，在部分病鱼的脑部MSRV出现弱阳性，将PCR产物进行第2次扩增后，条带明显增强，但其他组织未检测到MSRV(图3A)；在各种组织中LMBV均显示强阳性，只在肝组织的1条泳道为阴性(图3B)；ISKNV则均为阴性(图3C)。

图3 PCR鉴定结果

四、诊断结果

综合上述流行病学调查、水质监测及病原学检测结果，这一起加州鲈幼鱼高传染性疾病诊断为加州鲈虹彩病毒、迟缓爱德华氏菌共患病，并携带弹状病毒，属于病毒与细菌病并发症。

五、分析与讨论

1.细菌与病毒并发，细菌病防治方法疗效甚微

目前，对加州鲈危害较大的细菌性疾病包括诺卡氏菌病、迟缓爱德华氏菌病、嗜水气单胞菌病、温和气单胞菌病、维氏气单胞菌病等。单一的迟缓爱德华氏菌病，可采用外泼二氧化氯或碘制剂、内服恩诺沙星或氟苯尼考加以控制。但是，迟缓爱德华氏菌与虹彩病毒共同感染时，内服氟苯尼考与维生素C，加上外泼碘制剂，治疗效果甚微，最终导致大量死亡。因此，防止此病的蔓延关键在于预防。

2.加强检疫是防控加州鲈幼鱼弹状病毒与虹彩病毒病的关键

加州鲈病毒性疾病主要由弹状病毒、虹彩病毒及传染性脾肾坏死病毒引起。此类疾病至今尚无专一药物及治疗方法，主要通过施用疫苗、抗体和免疫增强剂加以预防。加州鲈弹状病毒是RNA病毒，发病时水温一般为18～25℃。在4-5月及10-11月期间，一旦转料不当或长途运输，感染病毒的鱼入池1周内就会大量死亡。加州鲈虹彩病毒是一种DNA病毒，通常使成鱼发病，高发于水温25～30℃的季节，水温突然上升、溶氧降低、药物刺激、过量投饵等是该病暴发的主要诱因。它们主要通过水体、饵料、鱼体间摩擦进行水平传播，弹状病毒也能通过亲鱼垂直传播给苗种。因此，可以推测，本次加州鲈幼鱼高传染性疾病的暴发是因引入的鱼苗已感染虹彩病毒；弹状病毒可能引入亲鱼时就传入，经过繁殖传给幼鱼；也可能是由引入的苗种带入。频繁的鱼苗分塘操作、转料不当等使弹状病毒在鱼体内快速繁殖，导致鱼苗免疫力下降、在池塘中打转，乃至死亡。随着养殖水温升高，弹状病毒繁殖受到抑制，但由于鱼的免疫力低下，摄食量下降，残饵多，高温下水质很快恶化，致使虹彩病毒在鱼体内大量扩增，最终导致疾病暴发和快速传播。

本案例中核酸检测结果与上述推测基本一致，病鱼组织中虹彩病毒病载量大，阳性率100%；弹状病毒只在鱼脑组织中显示弱阳性；传染性脾肾坏死病毒均是阴性。这一结果说明，加州鲈虹彩病毒同样可使加州鲈幼鱼发病，弹状病毒病与虹彩病毒病一旦暴发，损失惨重。从该病流行特点看，控制加州鲈病毒病的关键是严格实施苗种引入的检疫制度；做好引种、引苗时的核酸检测工作，是防止这类疾病蔓延的关键。

3.日常管理到位是防控病毒病的重要手段

从本案例加州鲈幼鱼发病至暴发死亡的过程可以发现，以下几个管理问题导致鱼体损伤、应激，使病原快速传播：①鱼苗频繁拉网产生外伤和应激；②开始转料时，大颗粒饲料比例太高，造成转料不当，饲料浪费，且败坏水质；③发病池与健康池网具混合使用，增加了病毒传播概率与速度。

加州鲈苗种培育阶段高传染性细菌性、病毒性疾病的防控，必须做好以下几项日常管理工作：①发病池工具需单独使用、及时消毒；②转料时不同粒径饲料的配比要适宜；③拉网前池塘中泼洒维生素C等抗氧化剂，以提高鱼苗抗应激能力；④在饲料中添加适量动保产品，以保护肝脏、增强鱼的体质；⑤采用微生态制剂调节水质，改善底质环境，最大程度降低病毒、细菌的滋生和繁殖。