对鱼类受精卵附着菌的清除作用

文/陈超然1陈昌福1孟长明2

在鱼类的人工孵化孵化过程中，对其受精卵进行消毒处理，清除附着在受精卵表面的细菌、真菌等各种有害微生物，对于提高鱼类受精卵的孵化率是很重要的。此外，对鱼类受精卵进行消毒处理，也是预防由于病原体的垂直传播所致鱼类疾病的有效方法之一。过去对鱼类受精卵的消毒大多采用甲醛和孔雀石绿等药物进行，现已证明这两种药物有致畸变作用。二氧化氯（ClO2）已经被公认为是新一代消毒剂，不仅具有良好的消毒效果，而且作用后无有害物质生成，对高等动物属于实际无毒物质。本试验采用浸泡的方式检测了ClO2对几种鱼类受精卵上附着菌的清除作用，旨在为将ClO2用作鱼类受精卵消毒剂提供实验依据。

一、材料与方法

1.供试鱼类受精卵

用于本试验的全部供试鱼类受精卵由华中农业大学水产站提供。将产出后4h以内已吸水的草鱼（Ctenopharyngodon idellus），鲢（Hypophthalmichthys molitrix）和鳙（Aristichthys nobilis）等3种鱼类的受精卵取回后，在每个盛有100.0mL去氯自来水的烧杯中放入100粒卵，将烧杯置于（22±1）℃的恒温水浴中，备用。

2.药物及其配制

用于本试验的稳定性粉状ClO2由河南省新乡市康大消毒剂有限公司生产。生产批号为010307。ClO2含量为6.6%。孔雀石绿由上海试剂二厂生产。生产批号为990615。临用前开包将两种药物各称取10.0g，分别溶解于100.0mL蒸馏水中，即为供试药物原液。

3.受精卵的消毒处理

在无菌条件下，将ClO2的原液定量加入放有鱼卵的烧杯中，使烧杯中药物的终浓度分别达到1.0mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L、5.0mg/L、6.0mg/L、7.0mg/L、8.0mg/L、9.0mg/L和10.0mg/ L；而对于孔雀石绿则是将药物的终浓度调整到1.0mg/L的浓度，分别作为两种药物的试验组；另设不添加药物的对照组。浸泡20分钟后捞取受精卵并用灭菌滤纸吸干其表面水分，称重后匀浆，作为检测细菌数量的鱼类受精卵匀浆液之用。

4.除菌效果的测定

将鱼类受精卵的匀浆液用灭菌生理盐水作倍比稀释后，从每个稀释浓度的匀浆液中吸取0.30mL,分别涂布在3个用脑心浸液琼脂（BHIA, Difco）培养基制作的平皿中，25℃条件下，培养48h后，统计菌落数量。

二、结果

1.对草鱼受精卵上附着菌的清除效果

经过用孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液浸泡后，对草鱼受精卵上附着菌数量的测定结果如表1所示。由表1可以看出，与对照组相比，经过用孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液

浸泡后，草鱼受精卵上附着菌的数量均有明显下降，并且随着ClO2溶液浓度的升高，受精卵上残存的细菌数量越少。

2.ClO2的对鲢受精卵上附着菌的清除效果

经过用孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液浸泡后，对鲢受精卵上附着菌数量的测定结果如表2所示。由表2可以看出，与对照组相比，经过用孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液浸泡后，附着菌的数量均有明显下降。

3.ClO2的对鳙受精卵上附着菌的清除效果

经过用孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液浸泡后，对鳙受精卵上附着菌数量的测定结果

如表3所示。由表3可以看出，与对照组相比，经过用孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液浸

泡后，鳙的受精卵上附着菌的数量均有明显下降，而且ClO2溶液浓度越高，受精卵上残存的细菌数量就越少。

三、讨论

本试验结果已经证明采用ClO2溶液浸泡鱼类受精卵，对受精卵上附着菌具有明显地清除作用。然而，虽然随着用于浸泡于鱼类受精卵的ClO2溶液浓度的上升，3种鱼类的受精卵上附着菌的数量均不断地下降，但是，即使经过浓度为10.0mg/L的ClO2溶液浸泡鱼类受精卵20分钟，也未能彻底清除3种鱼类受精卵上的附着菌。这可能是由于ClO2溶液的浓度偏低或者是由于浸泡的时间太短的缘故。

当ClO2溶液的浓度达到2.0mg/L以上时，对3种鱼类受精卵上附着菌的清除作用就优于1.0mg/L的孔雀石绿溶液。因此，本研究结果表明，以稳定性粉状ClO2取代孔雀石绿作为鱼类受精卵的消毒剂，可以达到更好的消毒效果。至于用ClO2消毒对鱼类受精卵上细菌群落的构成以及对受精卵的孵化率和鱼苗的畸形率有无影响，尚需要进一步研究。

表1 .孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液浸泡后草鱼受精卵上附着菌数量的变化

表2 .孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液浸泡后鲢受精卵上附着菌数量的变化

表3 .孔雀石绿和不同浓度的ClO2溶液浸泡后鳙受精卵上附着菌数量的变化

作者单位：1.华中农业大学教育部农业微生物重点开放实验室 2.河南省新乡市康大消毒剂有限公司