我们为了遏制水产养殖动物细菌性病原菌耐药性的蔓延，也是为了确保水产养殖产品的质量安全，最近几年来，我们一直在宣传建设简易水产养殖动物病害诊治实验室，现在全国范围内也建有几十家这类简易实验室了。

但是，在各地实验室运行过程中，我们发现即使根据在实验室完成的药物敏感性检测数据使用了“国标渔药”，也难以有效地治疗水产养殖动物的疾病。本文对这个问题发生原因进行了分析，同时提出了我们解决这个问题的设想。

为什么根据药敏检测结果

用药也不能治疗患病鱼类疾病

摘要：从患病水产养殖动物体内分离致病性细菌，在完成抗微生物药物对致病性细菌的药物敏感性检测基础上，选取适宜的抗微生物药物并实施精准使用药物，是指导水产养殖业者科学用药的重要措施。然而，由于实验室技术操作人员错误地选择药敏试验方法、试验中操作不规范、致病性细菌鉴定不准确、药敏试验的药物与治疗药物含量不同等，这些在药物敏感性试验技术操作中常见的问题，均可以导致即使依据致病性细菌药敏试验结果筛选的药物与剂量，也不能有效治疗水产养殖动物疾病的结果。

本文最后提出了可以采取采样实验室加中心实验室的模式，有效地避免由于药物敏感性试验技术操作人员专业素质问题引起检测结果不准确等，导致使用抗微生物药物不能有效治疗水产养殖动物疾病的问题。

关键词：药物敏感性试验，抗微生物药物；致病性细菌，精准用药

最近几年来，危害我国水产养殖动物的各种细菌性疾病高发，而治疗水产养殖动物细菌性疾病的抗微生物药物，也就是通过我国农业农村部允许使用的几种抗微生物药物的“国标渔药”，用于治疗患病水产养殖动物细菌性疾病的效果却越来越差，据不少地方的水产养殖业者反映，使用这些“国标渔药”已经完全没有治疗水产养殖动物疾病的效果。采用抗微生物药物的“国标渔药”难以有效治疗患病水产养殖动物细菌性疾病的主要原因，就是致病性细菌已经对这些“国标渔药”或多或少地产生了耐药性的缘故。

细菌对抗微生物药物会产生耐药性是自然规律，随着某种抗微生物药物使用次数的增加，细菌对这种抗微生物药物所产生的耐药性也会越来越强。遏制水产养殖动物致病性细菌对抗微生物药物耐药性的产生，其有效途径就是在采用抗微生物药物治疗患病水产养殖动物细菌性疾病之前，首先应该从患病水产养殖动物体内分离致病性细菌，通过完成分离致病菌性细菌对抗微生物药物敏感性检测后，再根据分离菌株对抗微生物药物的敏感性，确定治疗患病水产养殖动物细菌性疾病的用药剂量，只有做到精准用药，才有可能达到药到病除的疗效，从而让致病性细菌对所使用的抗微生物药物没有产生耐药性的机会。

广大的水产养殖业者也应该明白，为了在对患病水产养殖动物疾病治疗过程中，实现精准用药、达到药到病除的药物治疗效果，从患病水产养殖动物体内分离致病性细菌，完成分离菌株对抗微生物药物的敏感性检测的基础上，再根据药敏试验检测结果选择适宜的抗微生物药物，用作治疗患病水产养殖动物细菌性疾病的药物，这就是唯一科学、能有效治疗疾病的的方法与适宜药物选择途径。如果不设法完成这种筛选治疗水产养殖动物疾病有效药物的过程，只是根据“国标渔药”包装袋上印制说明书的内容，选择和使用药物的话，也就是“神仙”的用药方式，从本质上而言是与盲目、滥用抗微生物药物无异的，而滥用药物是难以获得有效治疗水产养殖动物疾病效果的。

为了避免在水产养殖过程中继续出现滥用抗微生物药物的问题，最近几年来，我们在全国各地协助一些企业和水产用兽药经销商，建成了一些简易水产养殖动物疾病诊治实验室。建设这类实验室的初衷，就是为了帮助解决长期困惑广大水产养殖业者的三个问题：即实现正确地诊断水产养殖动物的疾病，筛选能有效治疗患病水产养殖动物疾病的适宜药物，确定有效治疗水产养殖动物疾病的精确用药剂量。

这些简易水产养殖动物疾病诊治实验室在运行的过程中，或多或少地均出现了即使根据药敏试验结果，选用的药物也不能有效地治疗水产养殖动物疾病的问题。本文内容就是针对这种问题完成的原因分析，旨在帮助简易水产养殖动物疾病诊治实验室的工作人员避免这类问题继续发生，提高水产用兽药治疗水产养殖动物疾病的治疗效果。

1. 根据药敏试验结果用药不能实现药到病除主要原因分析

1.1选用的药敏试验方法不正确

完成致病性细菌对抗微生物药物的药物敏感性试验有多种方法，譬如简便易行的药敏纸片法和牛津杯法，其检测结果可以用于判断多种抗微生物药物对某种致病性微生物抑菌效力的差异，用于比较和定性多种抗微生物药物对某种致病性细菌抑菌效力的强弱。但是，用纸片法和牛津杯法获得的药物敏感性试验结果，是无法用于指导水产养殖业者决定抗微生物药物的用药剂量的，不能帮助水产养殖业者实现精准地确定用药剂量，达到有效治疗水产养殖动物疾病的目的。

帮助水产养殖业者科学地选择和精准地确定用药剂量的药物敏感试验方法，应该采用在试管（或者微量板）内完成的系列药物浓度稀释法。将从患病水产养殖动物体内分离获得的分离菌株，定量添加在盛装有经过系列浓度稀释供试抗微生物药物的试管中，经过恒温培养一定时间后读取最小抑菌浓度（MIC），最后根据各种抗微生物药物的MIC选择治疗药物和确定用药剂量，才能实现选择适宜药物和实现精准用药。如果选择了只是具有定性作用的纸片法和牛津杯法完成的药物敏感性试验结果，就不可能帮助水产养殖业者选择到适宜药物和做到精准用药。

1.2未按照规范操作程序完成药敏试验过程

在针对致病性细菌对抗微生物药物敏感性检测试验中，会涉及到多个操作技术环节，任何一个技术环节出现错误，均会影响到药物敏感试验结果的应用效果，甚至导致即使遵照药敏试验结果选用的抗微生物药物，在治疗水产养殖动物疾病应用中的失败。

首先，培养分离菌株后的稀释菌液浓度过低或过高。在药敏试验过程中，致病性细菌浓度对于获得准确的试验结果是至关重要的。必须将提纯的供试致病性细菌配制成一定浓度（106cells/mL）的菌液。按照CLSI及世界卫生组织（WHO）制定的供试致病性细菌菌液浓度标准为0.5麦氏单位。若菌液浓度过高，供试致病性细菌表现为对抗微生物药物产生耐药状态；与此相反，如果供试菌液浓度过低，供试致病性细菌表现为对抗微生物药物敏感性状态，其测得的结果即为假敏感。在配制药敏试验致病性细菌的菌液浓度时，部分药敏检测实验室是以硫酸钡浊度管比色的，其A625值常超出0.08~0.10范围，由于其稳定性比较差，容易导致药敏试验致病性细菌悬液浓度失控，结果就会出现假耐药或假敏感。还有的试验室在药敏检测中直接挑取供试菌落涂板，没有配制标准的菌悬液，其浓度﹥109cells/mL的范围，其药物敏感试验结果为假耐药的机率也可能大幅度增加的。

其次，供试致病性细菌纯化程度不良。进行致病性细菌药敏试验时，必须将各种致病性细菌做纯化分离后，分别进行不同药物种类的药敏试验。因为不同的致病性细菌对抗微生物药物的敏感程度是不相同的，如果致病性细菌种类不纯，该供试致病性细菌在试验中所产生的抑菌效果差异比较大，就会影响对药敏试验结果判断的准确性，最终导致执业兽医在患病水产养殖动物疾病治疗中，难以参考药敏试验结果选择到合适的抗微生物药物。

一般而言，应该避免直接挑取初分离的菌落做药敏试验，除非在暴发性疾病流行的紧急情况下、当革兰染色提示出分离微生物为单一种类时可以直接挑取菌落做药物敏感试验。但是，其结果也仅能作为药敏试验结果的初步报告，随后必须用标准方法重复做药敏试验。

1.3供试致病性细菌属于非致病菌

由于水产养殖动物的疾病大多是由于条件致病性细菌感染所致，这个特点给水产养殖动物的致病性细菌判断带来了一定的困难。如果从患病水产养殖动物体内分离获得的菌株不是致病性细菌，针对非致病性细菌完成的药物敏感性检测结果，也是抗微生物药物治疗失败的一个重要原因。

首先，一些简易实验室的设备和技术操作人员的专业素质有限，在致病性细菌分离、培养与纯化过程中，培养物受到了来自环境中微生物污染，培养出来的不是致病性细菌，药物敏感性试验结果就难以正确地指导抗微生物药物先择和使用了。

来自实验室环境中微生物污染可能出现在多个环节中，譬如可以发生在培养基制备、标本采集、接种、培养等各个操作环节。有些属于技术操作人员的问题，如果采样部位是养殖鱼类的鳃、肠道、体表病灶等，采集时很难做到不携非致病性细菌，在培养出微生物时都面临判断该微生物是致病的还是携带的非致病菌的问题。在这种情况下致病菌的判定是个难题，容易出现对致病菌的判断错误，需要检验者具备较丰富的经验，或者需要对分离致病性细菌进行种类鉴定。因为如果按照不是针对致病菌的药敏试验结果去治疗疾病的话，所选择的药物是难以消灭致病菌而获得良好治疗结果的。

1.4供试药物与治疗用药质量差异大

这也是简易水产养殖动物疾病诊治实验室容易出现的错误。完成致病性细菌药物敏感性检测的供试药物，是采用的抗微生物药物的标准品或者原料药物，而治疗水产养殖动物疾病则需要采用抗微生物药物的“国标渔药”。如果两者间质量存在差异，药物敏感性检测结果就难以用于指导水产养殖业者正确地选择和使用水产用兽药了。

为了避免这个问题的发生，我们主张直接采用水产养殖业者附近可以采购到的抗微生物药物的“国标渔药”制剂，完成对致病性细菌的分离菌株的药物敏感性检测试验。

2. 我们对应对方案的设想

要解决以上试验中的问题，关键在于提高实验室技术操作人员的专业素质。

然而，在短时期内要达成提高实验室技术操作人员专业素质的目标，也是比较困难的。因此，我们认为可以根据简易水产养殖动物疾病诊治实验室的设备和技术操作人员的水平与素质，划分为采样实验室和中心实验室，分别完成药物敏感性试验的不同工作内容。由分布在全国各地的简易水产养殖动物疾病诊治实验室技术操作人员，在无菌条件下从各地患病水产养殖动物体内分离致病性细菌，接种在盛有脑心浸液琼脂培养基（BHIA）培养皿中，直接将接种后的培养皿封口后，快递给中心实验室，即由采样实验室完成从全国各地患病水产养殖动物体内采集致病性细菌的工作，再由中心实验室技术操作人员完成致病性细菌纯化和药物敏感性检测的后续工作。

在完成全部药物敏感性检测的基础上，由中心实验室的技术人员提出检测报告并指导水产养殖业者选用适宜的抗微生物药物、确定治疗疾病的用药剂量，实施精准用药。

作者：华中农业大学 陈昌福 武汉科研时代生物技术有限公司 周鑫军。