标准化鱼病检查流程:鳃丝的标准镜检
鳃是鱼类的主要呼吸器官,也是非常容易病变的组织,对鳃丝进行镜检是鱼体检查的重要工作之一,鳃丝的镜检应做好两个标准化,分别是鳃丝水浸片制作的标准化和显微镜使用的标准化。
鳃丝水浸片的制作步骤:(鳃丝水浸片制作的标准化)
a.准备好干净的载玻片、盖玻片;
b.从3部位处(图1)剪取适量鳃丝,放置于载玻片上;
c.用剪刀将鳃丝推到载玻片中间,用胶头滴管滴一滴生理盐水(或塘水)到鳃丝上;
d.将盖玻片贴着载玻片边缘轻轻往下放,直至接触到鳃丝;
e.轻压盖玻片,使鳃丝均匀分布。
图1:鳃丝水浸片选取位置图,图2:通过镜检可发现初期的烂鳃
鳃丝水浸片制作过程中的注意事项:
a.选取的鳃丝最好是靠近下颌部位的,此处寄生虫相对较多;
b.鳃丝剪取时要适量,剪取过多会导致压片不匀,鳃丝相互重叠影响观察,鳃丝剪取过少可能导致样品观察不够细致;
c.压片时,应轻轻的按压盖玻片,如果按压过重会导致鳃组织被压碎,大量的血细胞等流出,影响观察结果,按压过轻则会导致鳃丝压不匀,相互重叠影响观察结果。
d.压片的速度不能太快,否则会有大量气泡被压进水浸片中,影响观察。
图3:剪取鳃丝过多导致压片不匀,影响观察,图4:压片用力过大导致组织破碎,影响观察
图5:压片过快产生大量气泡,影响观察,图6:正确压片后鳃丝相互分离,便于观察
显微镜的操作步骤:(显微镜使用的标准化)
a.将组装好的显微镜插上电源,观察是否通电;
b.将制作好的鳃丝水浸片置于载物台上,用夹子固定好,并将物镜中的低倍镜调节至观察部位;
c.调节粗准焦螺旋,将载物台调节至离物镜最近处;
d.调动粗准焦螺旋,将载物台逐渐向下移动,直至看见物体;
e.调动细准焦螺旋,直至观察到清晰的图像。
f.对观察的物体进行记录。
在显微镜的使用中,需要注意的是:
a.观察时需要先用低倍镜观察,然后再用高倍镜进行观察(先用红色的物镜,再用黄色的物镜);
b.注意光圈等细节的调节,往往将光圈调节到最小,观察的物体最清晰,进光量过多时视野较亮而无法观察到清晰的图像。
c.显微镜使用的插座最好有接地线,否则带水操作存在触电的风险。
图7:显微镜的外部构造,图8:通过光圈的调节可使观察更清晰
图9,10:同一视野下的显微图片-右图为调小光圈后的图像
重点观察寄生虫及鳃丝状况。常见的寄生虫可以通过镜检发现,如:指环虫、三代虫、车轮虫、小瓜虫、斜管虫等等;鳃丝的状况可作为评价鳃部是否病变的重要指标,如发现鳃丝有血窦时需要及时消毒处理。
图11,12:细菌感染引起的鳃丝溃烂-需对鳃丝进行镜检,以确定是否有寄生虫感染
图13,14:斜管虫可导致鳃丝粘液异常分泌(鱼苗扎堆)-斜管虫显微图片
图15:车轮虫显微图片引起鱼苗打转,图16:小瓜虫显微图片-示马蹄形的亮核(寄生部位形成白点)
图17,18:鳃部的孢囊-示孢囊的完整显微图片(包囊需被压破,才能看到里面的孢子虫)
图19:孢囊压破以后孢子虫的形态图,图20:鳃丝上的纤毛虫
图21,22:中华蚤寄生于鳃丝末端,引起鱼焦躁不安,尾鳍上翘-示中华蚤显微图
图23,24:钩介幼虫寄生于鳃丝可形成肉眼可见的白点-示钩介幼虫显微图片
25:三代虫显微图片-头部分为两叶,没有眼点,图26:指环虫显微图片-头部4叶,有4个眼点(三代虫、指环虫都属于单殖吸虫,可引起鳃丝粘液异常分泌,呼吸不畅)
图27:鳃丝上的血窦-提示为烂鳃初期,图28:鳃丝血管内的气泡
图29:烂鳃等可导致生理性缺氧的出现-即使池塘中溶氧充足,由于呼吸器官的坏死也可引起缺氧。
来源:水产前沿。作者:袁圣
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