岳彦峰，苏志星，王孝杉，蒋科技，彭士明

(中国水产科学研究院东海水产研究所，农业农村部东海与远洋渔业资源开发利用重点实验室，上海 200090)

六斑刺鲀是一种具有重要开发潜力的品种，本研究针对野生六斑刺鲀亲鱼捕获后驯养难度高、人工繁殖技术不成熟导致性腺发育缓慢及孵化率低的问题，开展了野生六斑刺鲀的诱导驯养、性腺发育营养强化以及孵化技术的对比实验，以期提高六斑刺鲀受精卵的孵化率，为完善六斑刺鲀苗种繁育提供参考资料。

一、材料与方法

1.野生六斑刺鲀亲鱼的来源及前处理

六斑刺鲀来自海南潭门港，收购时挑选体表无伤、鳍条完整、应激状态下能迅速潜逃、举刺或鼓气的个体，平均体长(23.3±1.0)厘米、平均体重(858.0±98.1)克/尾。运回实验基地后先用2毫克/升的甲醛(淡水)浸泡10分钟，再放入两口32米3水体的水泥池中进行5天的适应性暂养。暂养水温(28±2)℃、盐度33.0±0.5、pH 8.2～8.3，24小时不间断充气，采用黑暗沉淀加沙滤的同温度和同盐度洁净海水、每天更换400%洁净海水的方式保持水质稳定。两口池中各放80尾。

2.亲鱼的驯养培育

(1)驯化摄食。将六斑刺鲀适应性暂养结束后的两口池分别设为实验组A-Ⅰ和对照组B-Ⅰ，剔除活动状态不好的个体，A-Ⅰ池中保留60尾待驯化的野生六斑刺鲀，另再放入10尾体重与野生刺鲀体重相近的全人工繁育得到的子二代刺鲀；B-Ⅰ组留待驯化的野生六斑刺鲀为70尾。根据以往野生刺鲀驯化时间设定本实验为14天。两组均按饱食投喂的方法每天投喂2次，全部投喂冰鲜鱼和虾，将杂鱼和虾根据六斑刺鲀的口裂大小切割成块投喂。投喂后60分钟将池底残饵和粪便用虹吸法处理掉，水质控制与驯化暂养期间相同。每天观察记录A、B两组鱼的初次开口摄食时间、全部个体开口摄食时间、实验结束时两组鱼各自的摄食量、鱼活动状况。

(2)性腺发育的营养强化。强化添加剂主要成分包括乌贼内脏粉30%、列壸藻粉20%、海洋酵母20%、复合维生素5%、维生素E醋酸酯5%、大豆卵磷脂10%和南极磷虾粉10%，其中复合维生素(毫克/克混合物)由维生素B12.5、维生素B210、维生素C 20、泛酸钙25、烟酸37.5、维生素B62.5、叶酸0.75、肌醇100、维生素K 2、维生素A 1、维生素D 0.002 5、生物素0.25、维生素B120.05加纤维素填充到1克而成。添加剂按投喂量的5%添加，将强化添加剂按每粒胶囊3克的量添装到药用胶囊中，将胶囊放置在4℃冰箱中冷藏备用。

驯食实验结束后将两组中已经开口摄食的野生六斑刺鲀混合后再随机分成2组，分别为实验组A-Ⅱ和对照组B-Ⅱ，各60尾。实验的环境条件同驯食实验。投喂方法为：A-Ⅱ组在每次投喂前将添装有强化添加剂的胶囊夹塞到饲料鱼块或虾段中，投喂时保证80%的六斑刺鲀均摄食到2块；B-Ⅱ组的饲料鱼虾中不添加强化添加剂，投喂数量与A组相当。实验进行30天，管理方法与驯食实验相同，每天观察两组鱼的活动情况，实验结束时在A、B两组中分别随机选取6～7尾解剖观察性腺发育情况。记录雌雄个体数、性腺外观颜色、性腺成熟系数、雌鱼的绝对怀卵量，将雄鱼的游离精子稀释1 000倍后用平板计数法计量精子浓度。计算公式为：

性腺指数(%)＝性腺重/鱼体重量×100；

绝对怀卵量＝卵巢中样品的卵粒数/样品的重量×卵巢重。

二、结果

1.驯养培育

A-Ⅰ组中子二代六斑刺鲀在实验第1天下午就开始摄食，而A-Ⅰ组中的野生六斑刺鲀则在实验开始的第2天下午投喂饲料后出现摄食个体，实验第5天全部个体开始摄食，并在投喂饲料后所有个体能迅速游至投喂点，表现出争食行为。实验结束时平均每尾鱼日摄食量达到55克，约占鱼体重的6.5%。B-Ⅰ组中野生刺鲀在实验第4天出现摄食，实验开始后第9天全部个体出现摄食，所有个体出现争食行为则是在第11天。实验结束时平均每尾鱼日摄食量为35克，约占鱼体重的4.0%。混养子二代刺鲀的实验组开食时间较没有混养的对照组提前2天，全部个体开食的时间也比对照组提前4天。14天的实验结束时，实验组中平均每尾六斑刺鲀的摄食量较对照组多57%。

2.性腺发育强化实验

A-Ⅱ组取雌、雄鱼分别为3尾和4尾。雌鱼解剖后可见卵巢膨大，卵巢膜血管丰富清晰(图1-a)，卵巢重(161.8±31.3)克/个，性腺成熟系数达13.7%。剪开卵巢膜可见卵粒大部分游离(图1-b)，游离的卵直径达到(1 537.2±36.1)微米，将游离的卵子堆聚在一起颜色呈淡黄色；雄鱼解剖后可见精巢饱满，外观呈乳白色的椭圆形状(图1-c)，平均精巢重(5.8±0.9)克/个，雄鱼的性腺成熟系数为0.6%。划破精巢后精液呈黏稠状流出，且遇水即散开，精子浓度为(1.7±0.4)×109个/毫升。B-Ⅱ组取雌、雄鱼各3尾。未经强化添加剂饲喂的雌鱼卵巢与实验前相比也明显膨大，膜上血管丰富(图1-d)，3尾雌鱼的卵巢平均重为(128.3±33.7)克，性腺成熟系数为10.7%。解剖卵巢时未见有游离的卵粒(图1-e)，经测量，卵径为(1 401.5±87.7)微米；雄鱼精巢外观形状与A-Ⅱ组中的情况相近(图2-f)，颜色较A-Ⅱ组中雄鱼精巢略暗，精巢重仅(4.0±1.0)克/个，雄鱼性腺成熟系数为0.4%。划破精巢后大部分呈“面疙瘩”状，少量呈黏稠状流动，遇水不能立即散开，散开的精子浓度为(1.7±0.3)×109个/毫升。

图1 添加强化剂饲喂后六斑刺鲀卵巢、精巢形态特征

三、讨论

六斑刺鲀为肉食性鱼，在刚刚捕获时野性较强，应激反应强烈，在人工养殖环境条件下通常不轻易摄食。本实验通过在暂养池放入同种个体大小相近的子二代刺鲀，较对照组明显提前了驯化开食时间达4天。在子二代六斑刺鲀的养殖过程中，饲料种类以蓝圆鲹、玉筋鱼、龙头鱼以及牡蛎等为主，本实验驯化野生六斑刺鲀时直接投喂冰鲜杂鱼虾，省略了之前先投喂活饵再转成冰鲜杂鱼虾的过程。类似的驯化开食方法在野生牙鲆的亲鱼培育中，也有采用已驯化好的牙鲆与野生牙鲆混养的方法以诱导野生牙鲆开口摄食。

亲鱼的性腺发育可以通过环境因子和饲料中营养物质的调控来达到促性腺发育的目的，如通过突然改变光周期和营养强化等方法诱导大菱鲆产卵。在研究环境因子对性腺发育促进作用的同时，饲料的营养强化也具有重要的作用，鱼在通过摄食获取能量以满足生长发育的同时，也对生殖过程中的性腺发育提供了重要的物质来源。性腺发育需要特殊的营养物质来强化，亲鱼营养对提高鱼的生殖性能、卵子质量和仔稚鱼生长与存活等具有重要的作用。本实验在性腺发育的强化添加剂中除了大豆卵磷脂，同时还添加了乌贼内脏粉、列壸藻粉、海洋酵母和南极磷虾粉等，这些原料中同样包含了卵磷脂的成分。亲鱼发育需要饲料中有适量的卵磷脂。

饲料中不饱和脂肪酸和卵磷脂是亲鱼性腺发育的重要营养素，对亲鱼产卵效果、精卵质量和仔稚幼鱼的生长发育都有显著影响。本实验采用的乌贼内脏粉、列壸藻粉和南极磷虾粉等原料中富含DHA和EPA等高不饱和脂肪酸，保证了强化添加剂能满足亲鱼性腺的发育，这可能是导致实验组中六斑刺鲀卵巢绝对怀卵量与对照组形成显著性差异(P＜0.05)的原因之一。实验组和对照组中的雄鱼精巢重量、成熟系数和精子浓度虽然均未有显著性差异，但精巢的性腺发育已达到Ⅴ期，且颜色呈现出乳白色，遇海水后散开更快，未见如对照组解剖后的“面疙瘩”状。结果表明了强化添加剂还能有效地提高精巢的发育进程，从标准差值看实验组较对照组更具有同步性。